Робърт Антъни Де Ниро Джуниър е роден и израснал в Ню Йорк в квартал на Долен Манхатън, наречен „Литъл Итали“ (Малката Италия), в близост до „Гринуич вилидж“ – средище на артистичната общност на мегаполиса. Баща му Робърт Де Ниро Синиър е известен скулптор и художник, а майка му Виктория Адмирал също е художник.
Първата му роля в киното е от 1963 г. във филма на Браян Де Палма „Сватбено тържество“, който обаче излиза на екран едва през 1969 г. Първият сериозен успех за актьора е през 1973 г. с ролята на Джони Бой в „Бедняшки улици“ (Mean Streets).
След това Франсис Форд Копола го кани да изиграе младия Вито Корлеоне във втората част на „Кръстника“ (1974), за който получава наградата „Оскар“ за второстепенна роля.
Следват „Шофьор на такси“ (1976) и заснетия в черно-бяло „Разяреният бик“ (1980) с „Оскар“ за главна мъжка роля. Култови са филмите с участието на актьора „Едно време в Америка“ (1984), „Нос страх“ (1991), „Казино“ (1995) и комедиите „Анализирай това“ (1999) и „Анализирай онова“ (2002).
През половинвековната си кариера в киното Робърт Де Ниро е изиграл роли в близо сто филма.
